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蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)
酶抑制率法（分光光度法）試劑使用說(shuō)明
      本試劑為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)快速檢驗(yàn)方法GB/T5009.199-2003的配套試劑。酶活性和對(duì)農(nóng)藥的靈敏度指標(biāo)均達(dá)到或超過(guò)了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，可以在各種型號(hào)的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)儀（分光光度法）上使用，具有穩(wěn)定性好、靈敏度高和使用方便等特點(diǎn)。
一、試劑配制
1. 緩沖液試劑： 整包倒入大燒杯中，加1000mL純凈水溶解，酸堿度為pH8.0，常溫保存；
2. 乙酰膽堿酯酶： 取一支酶粉加20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周內(nèi)用完。也可將溶解后的酶液分成幾個(gè)小瓶，將其冷凍，用時(shí)融化，但不能重復(fù)多次冷凍、化解。
3. 顯色劑： 取一支顯色劑加入20mL緩沖溶液，避光保存；
4. 底物：取一支底物加20mL緩沖溶液，搖勻后置4℃冰箱中保存；
二、分析步驟
1. 樣品處理： 選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品1g，（非葉菜類(lèi)取2g）放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，手搖振蕩1～2分鐘，或超聲波振蕩30秒鐘，倒出提取液，靜置3~5min，待用。
2. 對(duì)照溶液測(cè)試： 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑，再加入2.5mL緩沖溶液，搖勻后于37°C放置15min，加入100微升底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時(shí)的吸光度A2，A2-A1=DA0。
3. 樣品溶液測(cè)試： 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑，再加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時(shí)的吸光度A2，A2-A1=DAt。
三、結(jié)果計(jì)算
結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
      當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。
      對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
四、注意
1. 每批樣品的控制時(shí)間、溫度條件必須與對(duì)照溶液的條件*一致。
2. 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，不要剪的太碎。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也不要剪的太碎。
3. 當(dāng)溫度條件低于37°C，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶對(duì)照溶液測(cè)試得到的吸光度A2-A1≥ 0.3以上，即可往下操作。當(dāng)對(duì)照溶液酶液的加入量大一些時(shí)，也可使A2-A1≥0.3上。
4. 當(dāng)吸光度大到無(wú)法讀取時(shí)，說(shuō)明測(cè)定液渾濁有干擾。
五、產(chǎn)品有關(guān)技術(shù)指標(biāo)
1. 代表性農(nóng)藥的檢出下限見(jiàn)下表
農(nóng)藥名稱(chēng) 檢出限mg/kg 標(biāo)準(zhǔn)要求檢出限mg/kg
甲安磷 0.65 2.0
氧華了果 0.5 0.8
2敵畏 0.01 0.1
呋南丹 0.01 0.3
2. 乙酰膽堿酯酶的活性：（室溫20°C以上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)）DA0≥0.3。
六、包裝及保存條件
每包可做200份樣品，0°C以下冰箱冷凍保質(zhì)期為三年，配成試劑后保存期為一周。